T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶，它可以催化单链或双链DNA T7 启动子下游NTP的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。本产品具体下列特点：

1. 对于T7启动子有高度的特异性，用于体外RNA（含小RNA）的合成。

2. 能识别修饰的NTP（生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的NTP），可用于标记探针。

3. 所得RNA可用于下列后续实验：核酸杂交、基因组DNA序列分析、核糖核酸酶保护测定(RNaseprotection assay)、反义RNA合成，体外翻译，RNA剪接、RNA二级结构分析、RNA-蛋白质相互作用、核酸扩增、siRNA、miRNA等小RNA。

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板（本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考）

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列（5’TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3’）加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端不要是3’突出。如果是3’突出（比如选择了Pst I来线性化质粒），则用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，

以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应（本试剂盒不含除酶和反应液之外的相关试剂）

1. 在一个RNase-free 的塑料离心管中，在室温下（不是在4℃下）按次序加入下列成分

2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。

3. 70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。

4. 取1-3 uL电泳检测转录效果。一般1 ug DNA可以合成 5-10 ug的RNA。

5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

三、如果需要去除DNA模板（仅产品不提供所需试剂）

1. 在体外转录体系中加入1 uL自备的 RNase-free DNase （3-5 U/uL）。

2. 37℃保温15-30分钟。

3. 补水到100 uL。

4. 用自备的等体积（100 uL）的Tris饱和酚-氯仿抽提去除残留的DNase和RNA聚合酶。

5. 加200 uL微量核酸沉淀剂（用前需要摇晃混匀），振荡后15000 rpm离心3-5分钟，弃上清。

6. 加入1 mL 75%乙醇，震荡10秒后15000 rpm离心3-5分钟，弃上清。

7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。晾干，所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。