热敏磷酸酶使用说明书

发布时间:2017/5/11 14:56:00

本产品是从南极微生物中克隆并在大肠杆菌中表达的热敏磷酸酶,它能催化除去DNA 或RNA 末端的5′磷酸基团。由于磷酸酶处理后的DNA 片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端,因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA 的背景。本产品具有下列特点:

1. 除去DNA、RNA、rNTPs 和dNTPs 5' 末端的磷酸基团。

2. 防止克隆载体的自连接。

3. 蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化。

4. 为5' 末端标记准备模板。

5. 去除PCR 产物中的dNTP 和焦磷酸盐。

6. 无核酸内切酶、外切酶、RNase 污染,SDS-PAGE 电泳经考马斯亮蓝染色检测其纯度大于95%。

7. 70℃加热5 分钟可使酶完全失活。

低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:

载体去磷酸化实验举例:

1. 限制性内切酶酶切1-5 μg 载体DNA,向内切酶反应Buffer 中加入1/10体积的10×热敏磷酸酶反应Buffer。

2. 加入1 μL 热敏磷酸酶(5 U),混匀。

3. 5' 末端或者平末端于37℃温育15 分钟,3' 末端于37℃温育60 分钟。

4. 70℃温育5 分钟热失活(或者按照限制性内切酶的要求失活)。

5. 进行连接反应。