柱式植物DNA提取试剂盒说明书

发布时间:2017/5/10 9:11:00

产品特点:

本产品是在植物DNA提取试剂盒础上开发的柱式植物基因组DNA 提取产品,可以用于多种植物基因组DNA(含叶绿体和线粒体DNA)的快速提取。

1. 纯度高,不含污染和抑制剂,可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting, microsatellite analysis 等

各种后续分子生物学实验。

2. 产率一般在3-30 ug/100 mg 样品。OD260/280 一般在1.8 以上。DNA 片段长度一般在40-50 Kb 左右。

3. 适用范围广,可以使用于绝大多数植物的各种组织。

4. 不会发生离心柱堵塞现象。

常温运输和保存,有效期一年。

注意:溶液A 和溶液B 容易产生沉淀,溶液B 比较粘稠,用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。

1. 65℃预热柱式植物DNA提取试剂盒溶液A,待其沉淀溶化后,充分混匀,取0.75 mL加入到10 mL 塑料离心管中并放置于65℃待用。

2. 称取植物组织0.1-0.5 g 左右,剪成微小的碎片,加入到有溶液A 的10 mL 塑料离心管中并短暂匀浆。也可以液氮研磨后将粉末加入到管中(建议不要在陶器或玻璃研钵中破碎细胞,因为二氧化硅会非特异地吸附DNA,降低DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。匀浆过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。

3. 将匀浆液(包括植物碎片)全部转移到新的1.5 mL 塑料离心管(此时匀浆液较为粘稠,可将枪头剪去一截后转移上清, 不能吸取的植物碎片可以小心倒入)。

4. 在匀浆液中加入0.5 倍体积预热的溶液B 到离心管中,颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。(由于溶液B 比较粘稠,可以将1 mL 枪头剪去一截再吸取)。

5. 65℃水浴3-5 分钟。如果室温放置,DNA 产量会降低10-20%。

6. 加入200 uL 自备氯仿,震荡混匀10-30 秒,此时溶液将呈乳白色。

7. 12,000 rpm 室温离心2 分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5 mL 塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。

8. 加入1.5 倍体积的溶液C,颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中,室温放置至少2分钟。

9. 12,000 rpm 室温离心1 分钟,DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。

10. 将0.5 mL 通用洗柱液加入离心柱中,12,000 rpm 室温离心1 分钟,弃穿透液。

11. 重复上步操作。

12. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5 mL 离心管中。

13. 将离心吸附柱放置在一新的1.5mL 塑料离心管中,加50-100 uL DNA 洗脱液2.0,室温放置3-5 分钟。

14. 12,000 rpm 室温离心1 分钟即得植物DNA 溶液。

15. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA 的能力较强,可以重复上步操作,以洗脱得到更多的DNA。

16. 直接取5-10 uL 电泳检测DNA,其余放冰箱备用。