本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Tag 引物进行逆转录反应，最终合成miRNA 对应的第一链cDNA。

本产品具有如下特点：

1. 两步式操作，先进行Poly(A)加尾，再进行逆转录反应。

2. 只需要1 ug 的total RNA。

3. 所得cDNA 可用于检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。

4. 与miRNA 荧光定量PCR 检测试剂盒兼容。

5. 特异性好，独特的miRNA 引物及反应体系避免了Pre-miRNA 的非特异扩增。

低温运输，-20℃保存

使用方法：

一、对miRNA 3' 末端进行加Poly (A)处理

1. 在冰上预冷RNase-Free 的反应管内加入以下试剂至总体积20 uL。注意需要加入E.coli Poly(A)聚合酶。

注：在反应中使用的Total RNA 必须含有miRNA。也可以直接使用miRNA（建议加入量为2–5uL，需根据目的miRNA 的丰度决定）。

2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在37℃反应60 min。所得的反应液可以直接进行下游实验（注意：只能把2uL 直接用于后续的RT 反应，多于2uL 则需要先乙醇-乙酸钠沉淀，再将加尾后的miRNA 溶于水，然后再取所需量用于RT。如果不经过沉淀，带入的残留的poly（A）聚合酶反应液将会干扰RT 反应），也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。

二、对带Poly (A)尾巴的miRNA 进行逆转录反应

3. 按照下表设置20 uL 体系的RT 反应

4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在42℃反应60 min。

5. 70℃保温10 min 终止反应。

6. 合成的cDNA 反应液可放置于-20℃保存；也可以暂时冰上放置，立即用于后续的荧光PCR 定量检测，不需要纯化。