大肠杆菌SURE感受态细胞说明书

发布时间:2017/5/10 20:41:00

本产品是采用大肠杆菌SURE菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的化学转化。该菌株主要是用来克隆不稳定DNA结构如重复序列、二级结构(如Z-DNA)等。

干冰运输、-80℃保存,有效期半年。

使用方法:

1. 取感受态细胞置于冰浴中。转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。

3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。

4. 每个离心管中加入450 μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。

注意:

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。