柱式粪便DNA提取试剂盒说明书

发布时间:2017/5/10 20:40:00

本产品是动物粪便DNA提取试剂盒(BTN70601)的柱式升级产品,专门用于从各种动物粪便中快速提取高质量的DNA。跟动物粪便DNAout,它具有下列特点:

1. 操作更加简单快速,一个样品只需要十多分钟的时间。

2. DNA更加纯净,OD260/280一般都在1.8以上,得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR扩增。

3. 每次微量提取可以处理100-300mg左右的样品,能得到5 ug 左右DNA,片段长度在30 Kb左右。

4. 可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的DNA。

5. 试剂无毒无害, 环保。

常温运输及保存,有效期一年。

使用方法:

1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后充分混匀,取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。

2. 称取0.1-0.3 g的粪便,加入到含预热溶液A的离心管中,震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作,可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理,然后再分到1.5 mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管,一定要让管底的粪便震荡起来。

3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。

4. 12000-15000 g室温离心3分钟,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色,实际颜色随样品而异,上清液的体积一般为300-400 μL)。

5. 在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色或淡黄色混浊状。

6. 将离心管冰浴至少5分钟。


7. 12000-15000 g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5 mL离心管中,上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡,体积在0.7 mL左右。

注意:下面第8-第9步的氯仿抽提操作可以省略,直接进入第10步,但DNA的产量会低50%左右,OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10步,则转移的溶液体积不要超过0.6 mL,否则没有空间加溶液C。

8. 加入0.2 mL的氯仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。

9. 12000-15000 g室温离心3分钟,小心转移上清到新离心管中。说明:离心后两相交界面将有白色膜状物,其中有机相部分颜色较深,一般呈淡棕色。将上清转移到新的1.5 mL离心管时,不要超过0.6 mL,否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。

10. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀。

11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液)。

12. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液。

13. 如果有必要,可以再加0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液。增加一步洗涤能使得到的DNA的纯度稍有提高,但产量稍微有所降低。

14. 12000-15000 g室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染DNA。

15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5 mL塑料离心管中,加入50-100 uL DNA洗脱液2.0。

16. 室温放置离心吸附柱1-2分钟。

17. 12000-15000 g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于冰箱待用。