柱式凝固血液DNA提取试剂盒说明书

发布时间:2017/5/10 11:39:00

本产品是在百奥莱博凝固血液DNAOUT(BTN71002)基础上改进的柱式升级产品,专门用于从新鲜或冻存的凝固全血(包括人和禽类)中提取基因组DNA。跟凝固血液DNAOUT 相比,它具有下列特点:

1. DNA 更加纯净,OD260/280 在1.8-2.0 之间,可直接用于PCR、酶切、杂交等。

2. 操作更加简单快捷,比凝固血液DNAOUT 快十分钟以上。

3. 每克新鲜凝固全血DNA 产量为20-50 ug DNA。

4. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。


常温运输,4℃保存,有效期一年。


使用方法:

1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后,充分混匀,取1 mL 到10 mL 或15 mL塑料离心管中并将离心管放置于65℃待用。

2. 称取凝固血液0.1-0.5 g,加入到预热的溶液A 中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。注意:如果是干的血块,用量不要超过0.2 g,但需将干血块剪成微小的碎片。

3. 将匀浆液置于65℃水浴保温5 分钟,然后将不超过0.75 mL 的匀浆液上清转移到新的1.5 mL 离心管中。注意:尽量不要转移凝固血液碎片。

4. 在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30 秒充分混匀后冰浴5 分钟。

5. 12000-15000 g 室温离心3 分钟,将上清液转移到新的1.5 mL 离心管中。

注意:如果上清液呈红色,属于正常现象。

6. 加入0.2 mL 的自备氯仿,震荡器上充分振荡30 秒混匀。

7. 12000-15000 g 室温离心3 分钟,两相交界面将有白色膜状物。将不超过0.6mL 的上清液小心转移到新的1.5 mL 离心管中。

8. 加入1.5 倍体积的溶液C,上下颠倒30 秒混匀后分两次转移到离心吸附柱中,每次转移后需要12000-15000 g 离心半分钟并弃穿透液。

9. 在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液,12000-15000 g 离心半分钟。

10. 在离心吸附柱中加入0.3 mL 的通用洗柱液,12000-15000 g 离心半分钟(此步为第二次洗涤,一般可以省略)。

11. 12000-15000 g 离心半分钟以去除残留通用洗柱液。注意:此步不能省略,否则残留的通用洗柱液会影响DNA 的后续反应。

12. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中, 加入100 uL 通用洗脱液,12000-15000 g 离心半分钟,管底溶液即DNA 溶液,可立即使用或放冰箱长期保存。