STED 显微镜，即受激发射损耗显微镜，是一种具有超高分辨率的先进显微镜技术。它通过特殊的激光技术，突破了传统光学显微镜的分辨率极限，能够实现更精细的结构成像。

其具有高对比度，可提供清晰图像，有利于对样品细节的观察与分析。并且，该显微镜可通过特异性标记，选择性地显示目标结构，适用范围广泛，包括生物学、医学、材料科学等多个领域。此外，它对各种类型的样品具有较好的兼容性。

STED 显微镜的工作原理是抑制非焦点区域的荧光发射，从而提高分辨率。在实际应用中，它为生命科学等相关领域的研究提供了重要的技术支持。

· 40nm空间分辨率

· 单像素时间0.5毫秒

· 激发波长576nm和647nm

· 测量模式：XY/XZ/XYZ

· AFM联用模式：同步成像/引导成像两种测量模式

CNPPVPdots和PDFDPPdots的STED成像。(a)双色STED 纳米镜的简化结构。(b)CNPPVPdots和PDFDPPdots的共焦和STED图像。两种类型的Pdots的信号分别由APD1（探测器1）和APD2（探测器2）记录。像素停留时间，1ms；视野，4.2×4.2μm2；200×200像素；~160秒/帧。(c)fwhm随STED 光束激光功率的变化从0增加到3mW(0?10MW/cm2).（d，e）粒子的强度分布，用(b)中的白色箭头表示，表示两个Ppots 的fwhm。在STED模式下区分了两个位置紧密的PDFDPPdot粒子。

共聚焦和STED模式线性分离后混合粒子和细胞样品的双色成像。从左到右：(a)CNPPV点和PDFDP点的混合物，CNPPV 标记的(b)CD44，CNPPV和PDFDP点标记的CD44，CNPPV点标记的(c)溶酶体和PDFDP点标记的CD44CD44，PDFDP点标记的(d)溶酶体和CNPPV点标记的CD44。消耗功率，10MW/cm2；像素停留时间，1ms；200×200像素。

活细胞双色STED成像和核内体相互作用的比色分析。(a)两种Pdots标记核内体的共聚焦和STED图像。白色箭头表示通过STED纳米镜可以识别相邻的核内体。消耗功率，10MW/cm2；比例尺，2μm（上面板），1μm（下面板）；像素停留时间，0.5ms；视场，10×10μm2；150×150像素；~40秒/帧。(b)通过共聚焦和STED图像获得的核内体的大小分布。(c)通过双色STED纳米镜实时监测四个个体核内体在不同时间的位置。感兴趣的区域，2×2μm2；损耗功率，10MW/cm2；像素停留时间，0.5ms；原始数据中的视场，10×10μm2；150×150像素；~40秒/帧；下一幅图像前的休息时间，<1s。(d)在(c).中核内体的动态相互作用示意图(e)(c).中显示的四个核内体的轨迹(f)比色比值（R、Fl绿色的/Fl红色的)，显示为一个绿色的三角形(RA，核内体A)，橙色正方形(RB，蓝色星体(RC和紫色的点(RD，分别在它们的相互作用过程中。(g)网格蛋白来源的核内体和小泡蛋白-1阳性核内体的相互作用模型示意图。

Pdots的超分辨率成像。Pdots的a)共聚焦和STED图像。在相同的Pdots有和没有760 nm耗尽光束阻塞的情况下，分别获得了共焦和STED图像。b)FWHM随STED光束激光功率从0到3 mW(0~10MWcm?2).c)(a)中相应的白线所指的单个Pdot的强度轮廓，显示了Pdots的FWHM。

HeLa细胞中Pdots的长期STED生物成像。a).HeLa细胞摄取生物素-pdots的共聚焦和STED图像。两个紧密间隔的NPs（用蓝色箭头表示）仅在STED图

像中被区分。b)由(a).中的线所表示的Pdots的强度轮廓STED光束功率保持在3 MW厘米.3?2.c)2小时内HeLa细胞中生物素-pdots和生物素-atto565的长期STED持续成像继续成像(视野35 × 35 μm2).d)蛋白中Pdots和Atto565的荧光强度变化。

线交换方法消除40纳米°月珠成像串扰的性能。(a)和(b)是通道1检测到的°新月珠（Ex/Em： 580/605nm）的共聚焦和STED图像。(c)是通道2检测到的通道1的°月珠的STED图像。(d)和(e)是通道2检测到的°新月珠（Ex/ Em： 660/680nm）的共聚焦和STED图像。(f)为通道1检测到的通道2的°月形珠的STED图像。比例尺：2um。

线开关STED成像模式下微管的超分辨率共定位分析。用免疫荧光用ATTO 594染料标记的微管的(a) STED成像。用ATTO647°染料免疫染色标记的(a)对同一区域的微管进行(b) STED成像。(c)是(a)和(b).的叠加物对水平和垂直方向的(d)高斯曲线进行共定位分析。

40nm混合°月珠的双色STED成像。40nm新月珠（Em：580/605nm）的共聚焦(a)和STED (d)成像。混合珠（40nm/Em：660/680nm）的共聚焦(b)和STED (e)成像。(c)是(a)和(b).的叠加(f)是(d)和(e)的叠加数。在面板(c)和(f)中，左下角用白色虚线框标记的两个区域被标记并显示在右上角。比例尺：2um。

网格蛋白和小泡内吞囊泡的STED超分辨率成像。网格蛋白囊泡的共聚焦(a)和STED (b)成像，其中网格蛋白用ATTO 647N偶联的二抗标记。小泡的共聚焦(c)和STED (d)成像，其中小泡蛋白-1用ATTO 647N偶联的二抗标记。比例尺：2um。

网格蛋白和小泡的双色STED超分辨率成像。(a)共聚焦成像。(b) STED成像。同时用ATTO 594或ATTO 647N偶联的二抗标记网格蛋白和cavolin-1的内源性蛋白。比例尺：2um。

网格蛋白与小泡内吞泡的融合状态。(a)不同程度融合的网格蛋白和小泡的双色STED成像。(b)网格蛋白与融合不同程度的小泡示意图。比例尺：2um。