C18液相色谱柱的使用及维护方法

在选择色谱柱之前，先多了解自己的样品和杂质，他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等，

1.样品是极性的且弱酸性的；就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测，即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱

2. 如果样品极性太强，或酸性太强；可以选择CN，NH2，或硅胶柱，HILIC（亲水色谱），也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱（缺点是离子对试剂平衡时间长，对流动相pH要求比较精密，否 则很难重复实验，另外离子对试剂很难洗下来，基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验）

3. 若样品是碱性的；可选择高纯硅胶柱（高纯硅胶缺少金属杂质，且硅胶端基封尾）或一些经过修饰的C18柱（如极性嵌入技术或碱去活技术等），他们都会减少碱性化合物的拖尾，一般会选择中性或偏碱的条件下做，因为这样可增加碱性样品的保留。

4.如果碱性化合物的极性太强，或碱性太强；可以选择宽pH的C18色谱柱在高pH值检测（优点是方法开发简单，缺点是目前实 现这一技术的色谱柱品牌比较少，价格也高）或者选用HILIC色谱柱（硅胶柱在反相条件下使用，这也是很经典的检测碱性样品的方法）选择强离子交换柱（缺点 是不能用来分析其它样品，对流动相pH要求比较精密，否则很难重复实验）也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。

C18柱是一种常用的反相色谱柱，它以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，因此有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，适用范围较广，是高效液相色谱仪分析中的色谱柱类型。

在使用液相色谱C18仪柱过程中，须注意以下事项：

1、新C18色谱柱在使用前，须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗，作用是使固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到状态。具体操作是，将配制好65%的乙腈/水冲洗后，把色谱柱进口端连接在色谱仪上，出口端放空（不可连上检测器，以免污染了检测器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干，过20分钟后再接上检测器，以1.0ml/min的流速，继续冲洗2~8小时；

2、液相色谱仪检测分析样品完毕后，须冲洗色谱柱。尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积； 

3、若色谱柱处于长期闲置状态时，要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中； 

4、由于C18柱的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响；由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；

5、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；  

6、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲 洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。