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EGTA是乙二醇二乙醚二胺四乙酸的简称,和EDTA同属于螯合剂,EGTA的镁配合物是很不稳定的,而EGTA钙配合物相对较稳定。所以,医学上常利用EGTA来构建无钙环境。
由于EGTA 和钙离子螯合可以抑制一些酶(如核酸酶)的活性,在蛋白质类药品生产中,可以添加EGTA来抑制蛋白酶对药品的降解,还能够防止金属离子对药物自身氧化的催化,有利于提髙药物在制备、存储和临床配制过程中的稳定性。但是,过量的EGTA进入到体内,螯合血液中的Ca2+,会造成血液中钙的流失,同时会螯合中枢神经细胞外的Ca2+,降低下丘脑细胞Ca2+,造成体温升高。因此,在药品生产中对EGTA 的含量必须严格把控,建立完整的EGTA含量检测方法。
高效液相色谱具有高压、高速、高效和高灵敏度等优点,在食品安全检测及药品残留中应用较广。目前,实验室通常采取滴定法来测定EGTA,其准确度和灵敏度难以达到微量检测的级别。本方法利用EGTA和EDTA的共性,对检测EDTA的方法进行优化改进,新方法操作简便,具有分离度好、灵敏度高、重复性好、回收率高等优点,其定量限、检出限、重复性及回收率等指标也符合国家药典要求,能够满足药品中EGTA 含量的检测。
实验仪器
实验中采用LC-600A智能全控液相色谱仪(南京科捷分析仪器有限公司),由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,具备多元高压洗脱、波长扫描等功能。广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
样品前处理:EGTA 对照品溶液 精密量取EGTA 标准储备液1 mL,置于10 mL容量瓶中,加入0.01 mol/L硫酸铜溶液1 mL,用0.06 mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液。
样品溶液 精密称取样品100.00 mg,置于10mL容量瓶中,加入0.01 mol/L硫酸铜溶液1 mL,用0.06 mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液。
EGTA 对照品与样品混合液 精密称取样品100.00 mg,置于10 mL容量瓶中,加入EGTA 标准储备液1 mL和0.01 mol/L 硫酸铜溶液1 mL,用0.06 mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液。
色谱条件:
色谱柱 | ULtimate-AQ C18柱(4.6mm×250mm,5μm) |
流动相 | 乙腈-四丁基氢氧化铵水溶液(质量分数约0.3% 四丁基氢氧化铵水溶液,醋酸调PH6.50)-醋酸钠溶液(35 mmol/L 醋酸钠,醋酸调PH6.50)(20:20:60,V/V/V) |
流速 | 1.5mL/min |
检测波长 | 245nm |
柱温 | 40℃ |
进样量 | 100μL |
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科捷
制造商
全新
LC-600A
南京