新城疫IgG测试剂盒

一、产品名称

通用名：新城疫IgG测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for chicken Antibodies to Newcastle Disease Virus(ELISA)

二、包装规格  96T×1/盒、96T×2/盒

三、预期用途  新城疫是由新城疫（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一种高度接触性，又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。主要特征是呼吸困难、便稀、经紊乱、粘膜和浆膜出血。

    新城疫IgG测试剂盒适用于鸡血清中新城疫特异性体的检测，可用于鸡新城疫疫苗免疫效果评价。

四、试剂盒原理

    新城疫IgG测试剂盒系由预包被新城疫（NDV）原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中新城疫特异性体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有新城疫的特异性体，则将与酶标板上原结合，经洗涤除去未结合的体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上原体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加T底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性体。

五、新城疫IgG测试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照

六、储存及期

于2～8℃避光保存，期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

七、适用仪器  含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

操作步骤

一、样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

二、检验方法  

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

结果分析

一、参考值

实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。

二、检验结果的解释

1.C.O（临界值）=0.13+阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.07时以0.07计算）；

2.样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。