猪流行性测试剂盒

一、产品名称

通用名：猪流行性测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine EpidemicDiarrhea Virus (ELISA)

二、包装规格  96T×1/盒、96T×2/盒

三、预期用途  猪流行性是由猪流行性（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）引起的猪的一种高度接触性肠道，以呕吐、和食欲下降为基本特征，各种年龄的猪均易感。

猪流行性测试剂盒用于检测猪血清、血浆中猪流行性体（PEDV-Ab），可用于猪流行性疫苗免疫效果评价。

四、试剂盒原理

    猪流行性测试剂盒系由预包被猪流行性（PEDV）重组N蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪流行性体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪流行性体，则将与酶标板上原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上原体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加T底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪流行性体。

五、猪流行性测试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照

六、储存及期

于2～8℃避光保存，期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

七、适用仪器  含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

操作步骤

一、样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

二、检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

结果分析

一、参考值

实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。

二、检验结果的解释

1.样品A值≥0.38为阳性；样品A值在0.2到0.38之间为可疑；样品A值＜0.2为阴性。

2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只体水平不足，建议补打相应疫苗。