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英文名称: DTNB
中文名称: 5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)
MF: C14H8N2O8S2
MW: 396.35
CAS: 69-78-3
DTNB为Ellman试剂。它用于比色法测定生物样 品中巯基。它易溶于水。在巯基化合物的存在下,无色的DTNB将被转变成黄 色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有吸收,DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。
配置方法:
准确称取0.198gDTNB用50mMNa2HPO4(pH=7.0)配制成50ml溶液,存放于棕色瓶中,于暗处低温保存备用。应该注意的是配置缓冲、浓度,储存时要避免见光。
应用举例:
半胱氨酸中自由巯基的定量检测方法
一、试剂的配制:
1、Tris-HCL缓冲液(0.25M):DDW准确配制后,用盐酸调节pH=8.3;
2、半胱氨酸标准溶液(1mM):准确称取0.017563gL-半胱氨酸(175.63),用1ml甲酸溶解,以DDW定容至100ml;
3、DTNB(分子量:396.35)标准溶液(10mM):准确称取0.198175gDTNB用50mMNa2HPO4(pH=7.0)配制成50ml溶液,存放于棕色瓶中,于暗处低温保 存备用
4、DTNB分析溶液(0.1mM):由1体积10mMDTNB标准液加99体积0.25M的Tris缓冲液配制而成,现用现配。
二、标准曲线的制作;
1、25℃条件下,用Tris缓冲液稀释半胱氨酸标准液配成梯度的稀释液(5.0ml), 其浓度分别为:0.00mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM、0.15mM、0.2mM;
2、取上述各浓度溶液1ml分别加入到5ml预先恒温于25℃水中的DTNB分析溶液,摇匀,准确静止10min,立即于波长412nm处测定吸光度值(A)。
根据目的蛋白的吸光度在标准曲线上读出对应的浓度即可
Product Name:DTNB
Product Number:D8130
Product Brand:Sigma
CAS Number:69-78-3