乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法

  乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法
  三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。

  1   实验部分
  1.1 仪器与试剂
  501-HPLC高效液相色谱仪（含UV501紫外-可见检测器1台，P501高压恒流泵1台，杭州赛析科技有限公司）；DT-230A色谱柱温箱；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。
  1.2 标准品溶液配制
  精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
  1.3 样品前处理
  称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC测定溶液。
  1.4 色谱条件：
  色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
  流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）
  流速：1.0ml/min
  波长：240nm
  温度：40℃
  进样量：20μl

  2   实验结果
  2.1 精密度实验
  取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。
                                                         表1 精密度实验

NO. Retention time（min） Peak High Peak Area
1 11..8
2 11..2
3 11..0
4 11..8
5 11..6
RSD(%) 0.23 0.82 0.57

                                  图1 三聚氰胺标准品

  2.2   标准曲线
  配置浓度分别为0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上6种标准工作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。用小二乘法以对照品浓度(横坐标X轴，µg/ ml)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归，求算标准曲线。

  2.2   加样回收率和重现性实验
取已知三聚氰胺含量的酸奶样品，加入一定量的标准储备液，按“样品前处理” 操作，平行制备3份，得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析，得到加样回收率及重现性结果，见表2。 Spiked(mg/kg) Recovery(%) RSD(%)
35.0 87.2 1.37

                                图2 空白酸奶样品

                                   图3 加酸奶样品

  2.2   检测限及定量限
  依据噪声值，按3倍信噪比，计算其理论检出限，为0.221 mg/kg；按10倍信噪比，计算其定量限，为0.738 mg/kg。
 
  3  结论
  本方法优化了高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺测定方法，该方法简化了前处理步骤，易于操作，线性关系良好，有较好的精密度和重现性，回收率满足国家标准的要求，检出限和定量限也符合目前三聚氰胺的检测要求。
  相关资料：饲料中三聚氰胺液相色谱仪