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相关推荐
1、水样过滤
采用美国EPA推荐的PALL公司Envirochek-HV囊式滤器对水过滤,将卵囊、孢囊及其他无知收集在过滤器上。该过滤器可用于实验室批量水样的过滤,也可以用于野外现场水样的过滤。过滤后的囊式滤器,用洗脱剂将拦截在滤囊上的颗粒物震荡洗脱下来,并将洗脱物收集在一个250毫升的离心管中。
Life Scienc
◇两虫检测囊式过滤器:水样过滤采用图2所示的方法将PALL公司囊式滤器(见图3)安装好,过滤器的滤囊用图4所示的震荡器进行洗脱分离。
◇特点
§ EPA1622&1623方法推荐产品。
§ 1um孔径的改良滤膜能100%截留两虫。
§ 性使用的设计避免了因其他因素的污染而造成的实验结果误差。
§ 于源水与自来水的隐孢子虫与贾第鞭毛虫的浓缩与回收,使用简单、方便、快捷。
2、免疫磁分离
离心管中的洗脱物通过离心分离作用,使颗粒物沉淀在离心管底部,同时去掉离心管中的上清液。将离心后的含有卵囊和孢囊的沉淀物用纯水混匀,并向其中加入Dynal公司的免疫磁分离试剂(Dynabeads GC-Combo试剂盒)进行磁分离。具体做法是:先用带有体(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)的磁珠捕获沉淀物的卵囊和孢囊;其次通过Dynal公司的MPC-S磁粒浓缩器将捕获有卵囊和孢囊的磁珠吸附在试管壁上,去掉未被吸附在试管壁上含杂质的液体,以卵囊和孢囊从沉淀物中分离出来的目的;再次加入盐酸将管壁上捕获有卵囊和孢囊的磁珠进行洗涤,以使卵囊和孢囊从磁珠上解离出来;后将含有卵囊和孢囊的纯化液转移至井形载玻片上进行制片。
◇隐孢子虫和贾第鞭毛虫的纯化—免疫磁分离技术:1999年美国局在EPA1623方法中规定利用IMS{Immuo Magnetic Separation}免疫磁分离技术Dynabeads来分选检测饮用水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊,其原理是:利用带有特异性体的磁珠与样品中的目标产物G/C特异性原相结合,在磁场中搞笑选择中分离。
3、IFA染色&镜检
待井形载玻片的纯化液干后,用NaOH中和井形载玻片上样品,再用Dynal公司的Aqua-GloTMG/C染色试剂盒,将卵囊和孢囊在井形载玻片上用磁荧光标记的单性体和DAPI溶液着色后,盖上盖玻片。然后,OLYMPUS荧光和差分干涉相衬(DIC)显微镜对着色样本进行检测。观察样本,对合卵囊和孢囊大小、外形、荧光特性的对象进行定性、定量分析。
◇研究型正置荧光生物显微镜系统:本实验中所配置的OLYMPUS正置阳光生物显微镜可以很好地完成明场和暗场显微镜观察,具有良好的性、稳定性和实验室广泛应用等特性。显微镜数码照相部分所配置的数码照相机,为应用的高清晰度数码相机,采用不同于民用的数码数据采集及系统,此款相机的成像可1200万像素级别,并且在使用明场拍摄的同时可以、稳定地完成荧光图像、暗场等拍摄的要求,对实验图像数据的记录、再现和分析提供了很好的可能和保障;该相机的相关系统是目前应用比较普通、性能比较的;如出现问题也方便维修和更换配件。配备微机及色彩打印系统效果。
· “EPA1623方法”所需部分产品信息
产品编号 | 产品名称 | 数量/包装 | |
颇尔(PALL)公司 | |||
12107 | Envirchek囊式滤器,包装 | 25个/箱 | |
4822 | 洗脱摇床,220V | 1台 | |
4820 | Laureth-12Paste,洗脱剂 | 50克/瓶 | |
15222CP | 蠕动泵,220V | 1台 | |
13158 | 真空/正压泵,220V | 1台 | |
Dynal公司 | |||
730.12 | 隐孢子虫/贾第鞭毛虫磁性分选试剂盒 | 50tts | |
740.03 | Dynal10 | 5支/包 | |
120.01 | DynalM | 个 | |
120.20 | DynalM | 个 | |
159.07 | DynalMx1混合液 | 个 | |
740.04 | Dynal载玻片 | 盒 | |
BTF | 隐孢子虫孢囊悬浮液 | 1×108 | |
A100FLK | Aqua-GloG/C染色试剂盒 | 70 tts | |
FITC80 | EasyStainG/C单克隆染色试剂 | 80tts | |
D9542 | DAPI染色试剂 | 1mg | |
CG100 | EasySeed质控试剂盒 | 10瓶/盒 | |
CSCG100 | ColorSeed质控试剂盒 | 10瓶/盒 | |
BTF | 隐孢子虫孢囊悬浮液 | 1×107 | |
BTF | 贾第鞭毛虫卵囊悬浮液 | 1×106 |