麻痹性贝类毒素(PSP)检测试剂盒的详细信息

1．概述本检测采用酶联免疫法定量检测麻痹性贝类毒素的存在。神经性贝毒是一种毒素，石房蛤毒素是麻痹性贝类毒素的一种。本检测可用于水产样本对贝类毒素的定性和定量检测，例如甲壳类动物的样本。对于甲壳类动物的需要提前制备样本。如果条件允许，阳性样本可以做HPLC，GC/MS或其他方法确认。2．安全性说明标准品溶液含有少量的石房蛤毒素。底物溶液含有四甲基联苯胺，终止液还有稀硫酸。避免皮肤与粘膜与终止液接触。若终止液与皮肤接触，可用水洗去。3．贮藏与稳定性试剂盒贮存在4-8 °C。使用前试剂盒中溶液要恢复到室温（20 —25度）。在保质期内试剂盒都可以正常使用。4．检测原理本实验采用直接竞争ELISA方法，用特异性抗体识别石房蛤毒素。样本中的石房蛤毒素可与石房蛤毒素-酶结合物竞争，同包被在微孔板上的兔抗-石房蛤毒素抗体结合。石房蛤毒素抗体与包被在微孔底部的二抗结合。洗板后加入底物溶液，显蓝色。蓝色的深度与石房蛤毒素在样本中的浓度成反比。颜色反应在规定时间内终止，颜色用酶标仪读值。每孔的样本浓度值可以通过标准曲线来读取。5．试剂盒局限性和可能的干扰样本中经常存在的大量的无机物和有机物经检测，并未为发现影响试剂盒的检测结果。然而，由于样本中发现有易变质的混合物，由它们引起的基质反应不可避免地会影响检测结果。操作失误也可能造成实验错误。如：贮存的问题。加样次序错误，加入溶液的体积错误，孵育的时间过长或者过短，影响免疫反应或者底物反应，实验过程中温度过低或者过高（低于10℃，大于30℃）。本试剂盒提供筛查神经性贝毒的筛查结果。阳性样本可采取其他的分析方法（GC,HPLC，其他方法）证明。A.试剂盒组成1．真空包装微孔板 （12 × 8条），包被一种羊抗兔二抗2．标准液（6）：0, 0.02, 0.05, 0.1,0.2 和0.4 ng/mL (ppb) 3．1 瓶6mL抗体（兔抗石房蛤毒素抗体）4．1 瓶6mL石房蛤毒素-HRP酶标记物5．2瓶25ml样品稀释缓冲液(10倍浓缩)(即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液 90ml蒸馏水)6．1瓶100ml洗板缓冲液(5倍浓缩) (即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液 40ml蒸馏水)7．1 瓶12 mL 底物（显色液TMB）8．1 瓶 12mL 终止液B.操作步骤1、在对应的微孔中加入50μL的标准和样品（推荐做2-3个重复）2、每个测试孔都加入50 μL 石房蛤毒素酶标记物溶液。3、每个测试孔都加入50 μL石房蛤毒素抗体溶液，用封口膜把微孔板盖上，轻轻的震荡微孔板30秒使里面的液体混匀。不要使液体洒出。4、在室温下孵育30分钟。5、孵育完成后，把封口膜取掉，将微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉残留的洗液。6、每个测试孔加入100μL的显色液（底物）。封口膜把微孔板盖上，轻轻的震荡微孔板30秒使里面的液体混匀。不要使液体洒出。室温孵育20-30分钟，此步骤避免太阳光照射。7、每个测试孔加入100μL终止液。8、用酶标仪在450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）（在加入终止液15分钟内完成）。C 结果分析结果分析可以利用商业ELISA分析软件(4-parameters,Logit/Log)。手工计算可以先计算标准的吸光度值的平均值，然后计算每个标准的%B/B0（用其它标准的吸光度值除以零标准的吸光度值乘以100%）。以每个标准的%B/B0做Y轴，以每个标准的石房蛤毒素的浓度做X轴构建标准曲线。通过利用标准曲线，把样品的%B/B0代入标准可以计算出样品中冈田酸的浓度。样品中石房蛤毒素的含量小于0.02 ppb认为阴性。当样品中石房蛤毒素的含量大于0.4 ppb要稀释后再测定。