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介绍
何谓PCR 简单的说,PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制.目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。
PCR的要素
基本的PCR须具备
1.要被复制的DNA模板 Template
2.界定复制范围两端的引物Primers.
3.DNA聚合酶 Taq. Polymearse
4.合成的原料(四种脱氧核苷酸)及水。
PCR的反应包括三个主要步骤:分别是1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热(至90~95℃)变性,将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。后在DNA聚合酶 e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。
PCR的早设想 核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。
用途:
用于科研及临床的基因扩增
定性PCR基因扩增
荧光/酶免终点定量DNA基因扩增
基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增
适合国内外各种PCR试剂盒传染病类(各型肝炎病毒、结核杆菌、STD性传播疾病、优生优育、支原体、衣原体、寄生虫等)、肿瘤类(P53、幽门螺杆菌等)、科研类(遗传鉴定、细菌病毒分型等)
PCR技术神奇就神奇在以下几个特点上:一是被扩增的DNA所需量极小,理论上讲一个分子就可以用于扩增了;二是扩增效率高,目的基因的量成指数形式扩增,几个小时就扩增1000万倍以上。现在PCR技术已经被广泛地应用于生命科学研究、食品卫生、医疗、法医及环境监测等诸多方面
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