紫外分光光度法(Ultraviolet Spectrophtometry)，又称紫外吸收光谱法( Ultraviolet Moleculor Absorption Spectrophtometry)，它是研究分子吸收190.0~1100.0nm波长范围内的吸收光谱。紫外吸收光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，是研究物质电子光谱的分析方法。通过测定分子对紫外光的吸收，可以对大量的无机物和有机物进行定性和定量测定。

    苯酚是一种剧毒物质，可以致癌，已经被列入有机污染物的黑名单。但在一些药品、食品添加剂、消毒液等产品中均含有一定量的苯酚。如果其含量超标，就会产生很大的毒害作用。苯酚在紫外光区的吸收波长λmax=270nm。对苯酚溶液进行扫描时，在270nm处有较强的吸收峰。

    定性分析时，可在相同的条件下，对标准样品和未知样品进行波长扫描，通过比较未知样品和标准样品的光谱图对未知样进行鉴定。在没有标准样品的情况下，可根据标准谱图或有关的电子光谱数据表进行比较。

    定量分析是在270nm处测定不同浓度苯酚的标准样品的吸光值，并自动绘制标准曲线。再在相同的条件下测定未知样品的吸光度值，根据标准曲线可得出未知样中苯酚的含量。

    仪器与试剂

    1．紫外可见分光光度计

    2．容量瓶（1000ml、250ml）

    3．比色管（50ml）

    4．吸量管（5ml、10ml）

    5．苯酚（AR）

    准确称取苯酚1.000g于200ml蒸馏水中，溶解后定量转移到1000ml的容量瓶中，作为储备液。

    紫外可见分光光度法测定苯酚含量实验步骤

    1．打开仪器及计算机、显示器、打印机电源，进入软件操作系统，待仪器自检结束，点击OK，进入操作主页面。

    2．波长扫描

    (1)确定波长扫描参数：

    光谱带宽2.0nm

    光度测量形式 吸光值

    扫描范围 200～500nm

    扫描速度 1000nm/min

    数据间隔点 1nm

    存储文件 选择路径和文件名

    (2)做基线

    将盛有参比液的比色皿分别放入参比光路和样品光路，开始进行基线扫描

    (3)波长扫描

    将盛有样品和参比液的比色皿分别放入参比光路和样品光路，点击开始扫描

    (4)定性分析

    将试样的波长扫描图与已知样的在相同条件下的波长扫描图或已知的谱图相比较，对试样进行定性分析

    3．定量分析

    (1) 标准系列的配制

    于5支50ml的比色管中，用吸量管分别加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚标准溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。

    (2) 确定定量分析参数

    设置a：方法 对每个标准品的重复读取次数 1

    对每个样品的重复读取次数 1

    是否需要测量标准样品 需要

    校正曲线 线性

    计算方式 用峰高计算定量的数值

    b：样品 总共测量样品的个数 6

    输入待测样品的名称 苯酚

    样品标签从第几号开始编辑 1

    输入标准样品浓度值

    在std栏中对标准样品进行标识

    c：质量控制 需要质量控制

    对有问题的测量结果标记后继续测量

    输入允许的浓度

    输入允许的浓度

    d：仪器 狭缝 2.0nm

    测定形式 吸光值

    强度倍数 1

    工作波长 270nm

    积分时间 5s

    把空白液注入两个比色皿内，并分别放入参比和样品光路，按“zero”进行调零，然后按“OK”

    e：报告 需要报告 要在线报告

    f：结果储存 输入选择的路径与文件名

    (3)开始定量测量，按照提示放入各样品

    (4)观察标准、样品及校正曲线