土壤DNA快速提取试剂盒的使用方法
发布时间:2017/3/13 9:59:00MP土壤DNA快速提取试剂盒,可在30分钟之内,快速、有效地从土壤以及其他环境样品中提取基因组DNA。适用于从土壤中的所有生物包括G+细菌、酵母菌、真菌、藻类、线虫类甚至真细菌的孢子、芽孢中提取基因组DNA。而且它还可以提取其他环境样品的DNA,如沉积物、排泄物、废水、雪水等。只需500mg的样品即可得到足够的DNA。实验原理为用特殊的裂解介质E处理样品,之后使用自旋过滤器基于硅吸附DNA原理的GENECLEAN?步骤进行纯化,得到的DNA可用于PCR、限制性酶切、电泳及其他下游实验。
很多用户对于我们代理的MP土壤DNA快速提取试剂盒的提取方法不是很清楚,特别是对于没有FastPrep?仪器的情况下,更是感到无从下手。为了解决用户的烦恼,特整理了Fast DNA? SPIN Kit for Soil土壤DNA快速提取试剂盒的提取方法,分享给大家,只需按照步骤操作,即使没有FastPrep?仪器的情况下,也可以快速提取土壤DNA!
1、称取0.3 g~0.4 g样品加入Lysing Matrix E Tube 中。(注意:需保证加完样品及所需溶液后,管中应留出不少于200 μL 空间)
2、加入978 μL SPB,加入122 μL MT Buffer。
3、盖紧Lysing Matrix E Tube的盖子,将离心管置于涡旋混合仪上,对管内物质进行震荡破碎均质化,时间设定为40 s~50 s。(注意:时间不可过长,有可能打断基因组DNA片段降低提取质量)从各个角度都可以震荡一下,不要光是底部。
4、在8000 r/min转速下离心15 min,有利于去除体积较大或具有复杂细胞壁结构的样品碎屑。
5、将上清液用大口枪头吸出转入1.5 mL的微离心管中,加入250 μL PPS,手持离心管晃动10次以混匀。
6、在8000 r/min下离心5 min,用大口枪头将上清液转移至5 mL离心管中。
7、摇匀Binding Matrix后,吸取1.0 mL加入上一步离心管中。
8、将离心管上下颠倒2 min后,静置3 min,使DNA附着于Bingding Matrix上,并等待二氧化硅基质沉淀。(这一步根据沉淀情况时间可以适当延长)
10、将剩余的上清液与沉淀物重新混匀,吸取约600 μL混合液移入SPIN Filter中,8000 r/min下离心1 min。
11、倒掉收集管中的液体,重复上一步操作直至5 mL离心管中的液体吸尽。
12、加入已制备好的SEWS-M溶液500 μL,用小枪头小心混匀后,8000 r/min下离心1 min后,弃去收集管中的液体。
13、为更好的去除杂离子,重复第12步,更换为1.5 mL离心管。
14、在8000 r/min下离心2 min,去除残留的SEWS-M溶液,然后更换为干净的1.5 mL离心管。(若发现残余溶液较多,可重复此步骤)
15、在室温下,将SPIN Filter风干5 min。(时间可以更久一些)
16、往SPIN Filter加入80 μL DES溶液,用小枪头小心使之与Binding Matrix 混匀,65℃水浴15 min(有利于DNA的溶出)。8000 r/min下离心2 min,可得到约50 μL的DNA溶液。再加入80 μL DES溶液重复第16步操作,一共可得到约100 μL的DNA溶液。
17、弃去SPIN Filter,将提取好的DNA存于-20℃冰箱保存。
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