建立高效液相色谱仪分析方法的步骤包括选择合适的分离方式与分析方法、分析条件的优化、定性与定量分析等。

一、选择合适的分离方式：

根据样品来源、浓度范围、组分特性、结构、分子量和溶解性等特性，选择适用于样品分析的HPLC分离方式。

二、选择合适的分析方法：

选择合适的色谱柱、流动相、检测器和样品预处理方法等。

三、分析条件的优化：

对流动相种类、配比、梯度、温度、流速、检测波长和进样量等分析条件进行优化。

四、定性与定量分析：

由获得的色谱图进行定性与定量分析。