时间分辨荧光免疫分析仪
时间分辨荧光免疫分析仪是一种采用非放射性同位素免疫分析技术的体外微量分析仪器。根据荧光标记物的荧光光谱的特点,通过延缓测量时间,排除标本中非特异性荧光的干扰,达到准确定量分析的目的 。
注意事项
1、使用环境:将仪器置于水平、稳固、洁净的地方。自然环境中稀土离子存在十分广泛,如空气灰尘和烟雾中,均有不同程度的含量,尤以北方地区为甚,所以应建立一个相对无尘的操作环境,防止器材、试剂和操作者在操作中不慎可能造成的污染。
2、操作时按照实验室安全工作准则,戴手套穿工作服,不得戴首饰,以避免潜在的危险;在实验中应该注意用电安全,不得触及带电部分;标本及其他废弃物的处理应遵守实验室相关规定,注意生物安全。
3、严格遵守操作规程,如仪器出现故障,立即向管理责任人或科室负责人报告,查明原因,及时处理,不得擅自“修理”,应登记“仪器设备使用登记”本。
4、当仪器不处于STANDBY或关机状态时,不能触及加样针、搅拌棒等仪器运动部分。
5、将血清标本吸入样品杯时,避免产生气泡或吸人凝块。
6、铕标记物是提高灵敏度、降低非特异性结合的关键,受标记方法、抗体浓度、稀土元素或其螯合物质量及标记中带来不均一性影响,每批标记物质量都有一定的差异,因此不同批号标记物敏感性不一,不能混用,且每次测定都需作标准曲线。
7、时间分辨荧光免疫分析技术的免疫反应与其他免疫反应的条件一样,易受pH、温度、时间等因素的影响。且TRFIA的免疫反应是在室温状态下不断振荡完成的,所以反应的室温等环境影响因素应严格控制。
8、TRFIA技术由于灵敏度极高,许多因素能够影响其准确度,因此在每一步的操作中都应严格按照操作规程进行操作。
优缺点
优点:使用镧系元素作为标记物,其在保证检测的灵敏度和特异性的基础上,通过时间分辨技术消除了背景荧光的干扰。检测多种抗原时可使用多种荧光素进行标记抗体,且灵敏度(标记物为Eu3+的检测灵敏度为10-18mol/well)和特异性均较高,较其他分析方法好。还有标准曲线剂量范围宽、自动化程度高、操作简便等许多优点。
缺点:试剂盒昂贵和易受内源性或外源性稀土离子的污染。
应用
时间分辨荧光免疫分析仪常用于蛋白质和多肽激素、半抗原、病原体抗原抗体、肿瘤标志物分析、干血斑样品、核酸及天然杀伤细胞的活力等方面的测定。
原理
时间分辨技术,即各种组织、蛋白或其他化合物在激发光的照射下都能发出一定波长的荧光,如血清蛋白可发射出短波长的荧光(激发光波长280nm,发射光波长320~350nm),胆红素发出波长较长的荧光(激发光波长330~360nm,发射光波长430~470nm),这些荧光为非特异性荧光,干扰了荧光免疫测定的灵敏度和特异性,但它们的荧光寿命一般在1~10ns,最长不超过20ns。而镧系元素的荧光寿命为10~100?s,时间分辨荧光免疫分析技术(time resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)利用这一特征,待血清、溶剂和其它成分的短寿命背景荧光完全衰变后,再测量镧系元素的特异性荧光,有效地排除了非特异荧光的干扰,极大地提高了分析灵敏度。