高效液相色谱柱

    1、柱压过高
    可能是微粒堵塞． 柱床膨胀，不可逆吸附， 细菌生长等造成的。也
    有可能是系统反压问题， 例如阻尼器堵塞，进样器堵塞， 管路或连接口
    堵塞． 在线过滤器不干净， 压力传感器不准确等。
    2、柱效低
    可能是色谱柱被污染、 过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成，例如流动相p H值或者组成不合适造成固定相损失。 流动相急剧变化造成固定相物理损坏， 机械振动造成固定相产生裂缝，柱床收缩或干枯。
    也有可能是仪器连接的问题， 认真检查进样器、检测器、 管路、 保护柱和在线过滤器等是否连接好，也可能是色谱柱没有平衡好， 进样量过大等问题。
    3、重复性差、不出峰、回收率低
    可能是色谱柱被污染， 流动相 p H值或者组成不合适造成固定相损失 ， 样 品溶剂 不同或样品本身不稳定， 固定 相极性过强或者流动相 极性过弱． 或者发生非特异性吸附。
    也可能梯度实验时平衡时间不足，温度波动， 流动相组成改变， 样品溶剂不同， 样品稳定性不好，方法的开发不好， 缓冲液的酸碱度不合适或者缓冲能力不足。

    色谱柱的柱效和保护柱
    拿到一根新柱时，一定要先看其使说明，然后测柱效，定期检测柱效， 保留在新色谱柱上得到的色谱图，并记录条件， 定期检测仪器的谱带展宽。 若应用于在线监测， 应对色谱柱提供在线的物理保护和化学保护， 例如采取安装在线过滤器， 自装填料保护柱和预装保护柱等。在线过滤器的作用是防止颗粒在柱头累计，优点是基本不影响柱效， 在需要高柱效的时候常用， 常更换的消耗品是滤芯和垫圈保护柱的作用是防止柱子被化学污染。 缺点是多数保护柱影响色谱柱的柱效， 特别是在用微柱时，常用的是普通 自装填料的保护柱。最近新出的一些保护柱例如S e n t r y — g u a r d保护柱， 它的特点是高质量、 高 效填料、 增加分析柱效、 对脏样品载荷能力大 ， 能延长保护柱的寿命，手可拧紧接头，安装时不需要工具， 省时省， 可换芯式设计， 能采用各种不同的填料， 主要适用于非常脏非常复杂的样品本底， 例如生化样品， 环境样品和食品等，或者不想做太多的圃相萃取，不想降低柱效果等情况。
    色谱柱的清洗
    对所做的样品要有充分的了解，用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗，对于硅胶柱，先用甲醇洗去极性杂质，然后用干燥的二氯甲烷和正庚烷 1 0 0 — 2 0 O r aL依次活化，对于键和相柱，一般用甲醇一氯仿一甲醇一水依次冲洗，每种色谱柱有特定的清洗方法，一定要看其使用说明
    色谱柱的存放
    存放前除去杂质和盐，采用合适的存放溶剂，避免色谱柱床的干枯，避免机械振动，防止细菌生长，注意存放的温度。

    系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。