高效薄层色谱
高效薄层色谱采用粒度分布很窄的微粒硅剂(5-10um)制备高效薄层板,用程序多级展开或园形展开技术使薄层色谱的灵敏度和分辨率大大提高。
特殊技术
1、多级展开:第一次展开后用同一展开剂再展一至多次,相当于增长了展距,使分离度改善。
多次展开时斑点的浓集,使圆形斑点变为椭圆形甚至线形。
(1)单向多级展开:同一薄层板,用同一溶剂沿同一方向,进行同一距离的展开,它能增加相邻点间的距离。
(2)增量多级展开:同一薄层板,用同一溶剂,沿同一方向,进行逐次增加展距的展开,它能提供一个比一般薄层色谱好得多的分离度。
(3)程序多级展开:同一薄层板,用同一溶剂,沿同一方向,逐次增咖展距,并在溶剂上升至前沿后用惰性气体或辐射加热控制薄层板上的溶剂,使溶剂由前沿退回原点。
但在溶剂展开与干燥过程中,薄层板一直与溶剂接触,这样使斑点在溶剂再次上升和溶剂缩回时浓集,最后使斑点集中成一条线。
2、分级展开:同一薄层板,沿同一方向,用两类显著不同的溶剂进行不同距离的展开,它对同一物质中吸附性质或分配性质存在着明显区别的组分分离是非常成功的。
3、双向展开:同一薄层板,沿两个不同方向,用两种性质不同的溶剂进行展开,它对每组分混合物的分离很有价值。
梯度洗脱:在展开过程中,两种或多种不同极性组成的展开剂不断地混合,连续改变浓度和极性,增加展开剂洗脱能力。
特点
1、提高分辨效率:分辨率与吸附剂微粒半径的平方成反比。100um的吸附剂制成的薄层,理论增板数为200左右,而小于20um硅胶制板其增板数可增至数千至上万,而5-10um硅胶板的增板数还要更高。
2、缩短分析时间:展开速度与吸附剂颗粒半径成正比,故颗粒越小,展开速度越慢,但因分离效率提高了之后可以大大缩短展开距离。
3、增加检出灵敏度:采用程序多级展开技术,可以克服因吸附剂颗粒小造成的拖尾现象,并可使圆或椭圆斑点集中在一条线,使斑点的单位面积中样品浓度增加,从而提高检出灵敏度。要求:点样体积小于0、1ul,原点直径小于1、0mm,甚至0、1mm。